Plasmide Double Nickase (h) Smad5: sc-400443-NIC

SMAD5 code pour le facteur de transcription Smad5, régulé par les récepteurs, un médiateur central de la signalisation BMP en aval des récepteurs sérine/thréonine kinases de type I/II. Après phosphorylation dépendante des BMP, Smad5 forme des complexes avec SMAD4 et transloque au noyau afin de contrôler des programmes d'expression génique qui régulent la prolifération, la différenciation, l'apoptose et la spécification de lignage. L'activité de SMAD5 est particulièrement importante pour la biologie hématopoïétique et endothéliale ainsi que pour les processus de mise en place du plan de développement contrôlés par des gradients de BMP. Une dérégulation de la signalisation SMAD5/BMP a été associée à des anomalies congénitales et à un remodelage de voies impliquées dans le cancer, faisant de SMAD5 un nœud utile pour disséquer des sorties transcriptionnelles spécifiques au contexte.

Smad5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SMAD5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SMAD5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SMAD5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SMAD5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.