Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Smad3 Double Nickase Plasmid (m): sc-421526-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Smad3 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Smad3 Double-Nickase-Plasmid (m) und Smad3 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Smad3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Smad3: sc-101154
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Smad3 Double Nickase Plasmid (m) | sc-421526-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Smad3 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421526-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Smad3 kodiert einen R-SMAD-Transkriptionsfaktor, der TGF-β-/Activin-Rezeptorsignale vom Zytoplasma in den Zellkern weiterleitet, um Genprogramme zu regulieren, die Proliferation, Differenzierung, extrazelluläre Matrixproduktion und Immunmodulation steuern. Nach rezeptorvermittelter Phosphorylierung bildet SMAD3 Komplexe mit SMAD4 und wirkt mit linien-/zelltypspezifischen Kofaktoren zusammen, um die Chromatinzugänglichkeit und die Transkriptionsantworten zu formen. Die SMAD3-Signalübertragung überschneidet sich mit MAPK-, PI3K–AKT- und NF-κB-Signalwegen und trägt zu kontextabhängigem Crosstalk zwischen entzündlichen und fibrotischen Reaktionen bei. Eine fehlregulierte SMAD3-Aktivität ist an pathologischem Gewebeumbau und Fibrose, veränderter Immunhomöostase sowie Signalgebung im Tumormikromilieu beteiligt und macht SMAD3 zu einem zentralen Knotenpunkt für mechanistische Studien der TGF-β-getriebenen Biologie.
Smad3 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Smad3-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Smad3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Smad3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Smad3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.