Plasmide Double Nickase (m) Smad2: sc-421525-NIC

Smad2 chez la souris code un facteur de transcription R‑SMAD qui transmet les signaux des récepteurs TGF‑β/Activine vers le noyau, où il coopère avec SMAD4 pour réguler des programmes d’expression génique dépendants du contexte. Par la formation de complexes dépendante de la phosphorylation et l’engagement de la chromatine, SMAD2 contrôle des processus tels que la transition épithélio‑mésenchymateuse, le remodelage de la matrice extracellulaire, la régulation du cycle cellulaire et la spécification des lignages au cours du développement. L’activité de Smad2 s’articule avec les voies MAPK et PI3K et est modulée par des SMAD inhibiteurs ainsi que par une dégradation médiée par l’ubiquitine, ce qui façonne la durée et l’amplitude du signal. Une signalisation TGF‑β/SMAD2 dérégulée est fréquemment étudiée dans la fibrose, l’inflammation et la biologie du cancer, où l’équilibre de la voie influence la prolifération, la différenciation et les phénotypes invasifs.

Smad2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Smad2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Smad2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Smad2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Smad2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.