Plasmide CRISPR/Cas9 KO Smad2 (m): sc-421525

Présentation

Smad2 code un transducteur de signal intracellulaire de la voie canonique TGF-β/Activine/Nodal, agissant comme un R-SMAD qui est phosphorylé sur son extrémité C-terminale par des récepteurs de type I et forme des complexes transcriptionnels avec SMAD4. Dans les cellules de souris, SMAD2 régule des programmes géniques contrôlant la mise en place des structures embryonnaires, les décisions de destinée des cellules souches, la transition épithélio-mésenchymateuse, le remodelage de la matrice extracellulaire et la modulation immunitaire. Par une régulation transcriptionnelle dépendante du contexte, SMAD2 influence la prolifération, la différenciation et l’apoptose, en intégrant les signaux des ligands de la superfamille TGF-β avec ceux d’autres réseaux de signalisation. Une signalisation SMAD2 dérégulée a été impliquée dans des processus liés à la fibrose, des phénotypes inflammatoires et la biologie tumorale via une modification de l’activité de la voie et de l’expression des gènes cibles.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Smad2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Smad2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Smad2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Smad2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Smad2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Smad2 pour l'étude de la signalisation de Smad2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Smad2 essentiels à la fonction de Smad2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Smad2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Smad2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Smad2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Smad2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Smad2 plasmide HDR (m) et le Smad2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Smad2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Smad2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.