Plasmide Double Nickase (m) Smac: sc-426096-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Smac correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Smac Double Nickase (m) et le plasmide Smac Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Diablo. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Smac | sc-426096-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Diablo** code **Smac** (*second mitochondria-derived activator of caspases*), une protéine de l’espace intermembranaire mitochondrial libérée lors de l’apoptose intrinsèque. Smac favorise l’activation des caspases en se liant aux protéines inhibitrices de l’apoptose (IAP), telles que XIAP et les cIAP, levant ainsi l’inhibition médiée par les IAP sur les caspases-3, -7 et -9. Par cet axe de régulation IAP–caspases, Smac contribue à déterminer le seuil d’activation de l’apoptose mitochondriale en aval du stress cellulaire, des dommages à l’ADN et des signaux développementaux. Une signalisation Smac/IAP dérégulée est fréquemment étudiée dans des contextes de survie cellulaire anormale et de résistance à l’apoptose, notamment dans des modèles d’oncologie et de neurodégénérescence.
Smac Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Diablo dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Diablo. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Diablo. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Diablo.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.