Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sm D3 (h): sc-405302

Présentation

SNRPD3 code la protéine centrale Sm D3, un composant conservé de l’anneau Sm qui s’assemble sur les snARN pour former les petites ribonucléoprotéines nucléaires spliceosomales (snRNP). Sm D3 soutient la biogenèse des snRNP et la fidélité de l’épissage des pré-ARNm, ce qui la relie à la dynamique d’assemblage du spliceosome et au contrôle qualité du traitement de l’ARN. La perturbation des protéines du cœur Sm peut modifier l’utilisation des isoformes de transcrits et affecter des programmes d’expression génique qui régissent la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress et la différenciation. Comme l’épissage aberrant est une caractéristique fréquente de nombreux états pathologiques, SNRPD3 est souvent étudié comme un nœud reliant l’intégrité du spliceosome à des phénotypes de maturation de l’ARN à l’échelle du génome dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Sm D3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SNRPD3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SNRPD3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SNRPD3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Sm D3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SNRPD3 pour l'étude de la signalisation de Sm D3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SNRPD3 essentiels à la fonction de Sm D3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SNRPD3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Sm D3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Sm D3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SNRPD3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Sm D3 plasmide HDR (h) et le Sm D3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SNRPD3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SNRPD3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.