Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sm D3: sc-405302-ACT

SNRPD3 code la protéine centrale humaine Sm D3, un composant conservé de l’anneau Sm qui s’assemble sur des snARN riches en U pour former des snRNP spliceosomaux. Sm D3 soutient la biogenèse des snRNP et la fidélité de l’épissage du pré‑ARNm, des processus étroitement couplés à la transcription, au contrôle qualité des ARN et aux programmes du cycle cellulaire. Une perturbation des protéines Sm peut modifier le choix des sites d’épissage et l’équilibre des isoformes de transcrits, contribuant à un stress global de maturation des ARN fréquemment observé dans des contextes prolifératifs et de neurodéveloppement. SNRPD3 constitue donc un point d’entrée utile pour étudier l’assemblage du spliceosome, le métabolisme des snARN et la régulation des réseaux d’expression génique dépendante de l’épissage.

Sm D3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SNRPD3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sm D3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SNRPD3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SNRPD3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sm D3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SNRPD3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sm D3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sm D3 dans les cellules tumorales présentant une expression de SNRPD3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.