Plasmide Double Nickase (h) SLPI: sc-418559-NIC

L’inhibiteur sécrétoire des peptidases leucocytaires (SLPI) est un petit inhibiteur de protéases à sérine sécrété qui contribue au maintien de l’homéostasie des barrières épithéliales et muqueuses en limitant l’activité de l’élastase des neutrophiles, de la cathepsine G et de protéases apparentées. Au-delà de sa fonction antiprotéase, SLPI peut moduler la signalisation immunitaire innée et l’expression de gènes inflammatoires, influençant des processus tels que la réparation des plaies, la défense antimicrobienne et le recrutement des leucocytes. Une expression altérée de SLPI a été rapportée dans des affections inflammatoires des voies aériennes et de la peau, dans l’inflammation chronique des muqueuses et dans le remodelage tissulaire associé aux infections, ce qui en fait un nœud moléculaire utile pour étudier l’équilibre protéases–antiprotéases. SLPI est donc pertinent pour la recherche sur la biologie épithéliale, la régulation immunitaire et les facteurs du microenvironnement qui façonnent l’inflammation associée aux maladies.

SLPI Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SLPI dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SLPI. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SLPI. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SLPI.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.