Plasmide CRISPR/Cas9 KO Slp2 (h): sc-405977
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Slp2 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Slp2, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Slp2 Antibody (C-4): sc-393847
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Slp2 (h) | sc-405977 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
SYTL2 code la protéine 2 de type synaptotagmine (Slp2), un effecteur de Rab qui relie les vésicules de sécrétion à la membrane plasmique grâce à des interactions phospholipidiques médiées par le domaine C2 et à une activité de liaison aux Rab. Slp2 contribue à l’exocytose régulée ainsi qu’aux événements d’arrimage et de « priming » des vésicules, qui influencent le trafic membranaire, le renouvellement des récepteurs et la sécrétion compartimentée dans divers types cellulaires. Par son rôle dans le trafic dépendant des Rab, SYTL2 peut affecter la dynamique de signalisation, l’organisation du cytosquelette et les programmes de motilité cellulaire. Une expression ou une fonction altérée de régulateurs du trafic vésiculaire tels que SYTL2 a été associée à une sécrétion dérégulée et à des phénotypes invasifs dans le cancer et d’autres maladies où les voies de transport membranaire sont remodelées.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Slp2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SYTL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SYTL2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SYTL2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Slp2.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SYTL2 pour l'étude de la signalisation de Slp2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de SYTL2 essentiels à la fonction de Slp2
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SYTL2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Slp2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Slp2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SYTL2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Slp2 plasmide HDR (h) et le Slp2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SYTL2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SYTL2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.