Plasmide CRISPR d'Activation (h) Slit3: sc-402553-ACT

Le gène humain **SLIT3** code **Slit3**, un facteur de guidage sécrété qui signale principalement via les récepteurs **ROBO** afin de réguler la migration cellulaire directionnelle, le guidage axonal et la mise en place des tissus. La signalisation **Slit3–ROBO** s’entrecroise avec le remodelage du cytosquelette et des processus dépendants des petites GTPases, qui façonnent la motilité et le positionnement des cellules au cours du développement et de l’homéostasie tissulaire. Dans des contextes non neuronaux, **SLIT3** a été associé à la biologie vasculaire et squelettique, influençant les réponses angiogéniques et le remodelage ostéogénique via une communication paracrine. Une expression ou une signalisation **SLIT3** dérégulée a été associée à des phénotypes d’invasion/migration altérés et au remodelage du microenvironnement tumoral, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour l’étude des voies liées aux métastases et des interactions stroma–épithélium.

Slit3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLIT3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Slit3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLIT3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLIT3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Slit3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLIT3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Slit3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Slit3 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLIT3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.