Plasmide CRISPR d'Activation (h) Slfn14: sc-415573-ACT

Le gène humain **SLFN14** code le membre 14 de la famille Schlafen (Slfn14), une protéine putative de liaison à l’ARN impliquée dans la régulation post-transcriptionnelle et le contrôle de la synthèse protéique au sein des lignées hématopoïétiques. Les protéines SLFN sont globalement associées à la signalisation de l’immunité innée et aux réponses au stress cellulaire, avec des fonctions susceptibles d’influencer la prise en charge des ARN associés aux ribosomes et le rendement de la traduction. **SLFN14** est particulièrement pertinent pour la biologie plaquettaire, et une altération de sa fonction a été associée à des thrombocytopénies héréditaires et à des phénotypes de dysfonctionnement plaquettaire. Ces caractéristiques font de **SLFN14** un nœud utile pour étudier le contrôle de l’expression génique lors de la maturation des mégacaryocytes, la production de plaquettes et des programmes de régulation à l’interface de l’immunité.

Slfn14 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLFN14 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Slfn14 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLFN14 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLFN14, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Slfn14. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLFN14 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Slfn14 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Slfn14 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLFN14 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.