Plasmide CRISPR d'Activation (h) Slfn13: sc-414596-ACT

SLFN13 humain (membre 13 de la famille Schlafen) code Slfn13, une protéine stimulée par l’interféron impliquée dans la régulation de l’immunité innée et les réponses au stress cellulaire. Les protéines de la famille Schlafen sont couramment associées au contrôle de la progression du cycle cellulaire, de la différenciation et des programmes antiviraux en aval de la signalisation des interférons de type I, en modulant les états transcriptionnels et traductionnels lors de l’activation immunitaire. L’expression de SLFN13 a été associée à des contextes inflammatoires et aux interactions tumeur–immunité, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier comment les voies induites par l’interféron remanient les réseaux d’expression génique dans des types cellulaires impliqués dans la maladie. Ces fonctions positionnent Slfn13 comme un nœud utile pour explorer les circuits de réponse à l’interféron, les mécanismes d’échappement immunitaire et la régulation de la croissance dépendante du contexte.

Slfn13 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLFN13 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Slfn13 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLFN13 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLFN13, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Slfn13. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLFN13 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Slfn13 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Slfn13 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLFN13 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.