Plasmide CRISPR d'Activation (h) Slfn11: sc-401137-ACT

Le gène humain SLFN11 (Schlafen family member 11) code la protéine Slfn11, une protéine stimulée par l’interféron qui relie la signalisation immunitaire innée à la régulation de la réplication de l’ADN et à la stabilité du génome. Slfn11 module les réponses au stress de réplication en influençant la chromatine et la progression des fourches de réplication, modelant ainsi le devenir cellulaire après un stress génotoxique et des perturbations du métabolisme des nucléotides. L’expression de SLFN11 et sa régulation épigénétique ont été étudiées dans le contexte de la biologie tumorale, où une activité altérée de Slfn11 est corrélée à des modifications de la capacité proliférative et de l’engagement des voies de réponse aux dommages de l’ADN. En conséquence, SLFN11 est fréquemment étudié dans le cadre des mécanismes de stress de réplication, des programmes transcriptionnels induits par l’interféron et des déterminants cellulaires de la sensibilité aux agents génotoxiques.

Slfn11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLFN11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Slfn11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLFN11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLFN11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Slfn11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLFN11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Slfn11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Slfn11 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLFN11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.