Plásmido CRISPR de Activación (h) Slfn11: sc-401137-ACT

SLFN11 humano (miembro 11 de la familia Schlafen) codifica Slfn11, una proteína estimulada por interferón que conecta la señalización inmunitaria innata con la regulación de la replicación del ADN y la estabilidad del genoma. Slfn11 modula las respuestas al estrés replicativo al influir en la cromatina y en la progresión de la horquilla de replicación, configurando así los resultados celulares tras el estrés genotóxico y las alteraciones del metabolismo de nucleótidos. La expresión de SLFN11 y su regulación epigenética se han estudiado en el contexto de la biología tumoral, donde la actividad alterada de Slfn11 se correlaciona con cambios en la capacidad proliferativa y con la activación de vías de respuesta al daño del ADN. Como resultado, SLFN11 se investiga con frecuencia en los mecanismos de estrés replicativo, los programas transcripcionales impulsados por interferón y los determinantes celulares de la sensibilidad genotóxica.

Slfn11 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLFN11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Slfn11 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLFN11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLFN11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Slfn11. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLFN11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Slfn11 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Slfn11 en células tumorales con expresión de SLFN11 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.