Plasmide CRISPR d'Activation (h) SLC7A10: sc-405035-ACT

SLC7A10 (également appelé Asc-1) code un transporteur d’acides aminés neutres indépendant du sodium, localisé dans la membrane plasmique, qui assure l’échange de petits acides aminés, notamment la glycine, la L-sérine, l’alanine et la thréonine. En régulant la disponibilité intracellulaire des acides aminés, SLC7A10 contribue au métabolisme cellulaire et à l’équilibre rédox via l’homéostasie des acides aminés, et peut influencer des processus liés aux neurotransmetteurs dans les tissus excitables où la gestion de la glycine et de la sérine est cruciale. Des altérations de l’expression ou de l’activité de SLC7A10 ont été associées à des perturbations des programmes métaboliques et des réseaux de signalisation impliqués dans la croissance cellulaire et les réponses au stress. Ces caractéristiques font de SLC7A10 une cible pertinente pour des études mécanistiques du transport des acides aminés, du reprogrammation métabolique et des interactions entre voies de signalisation dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.

SLC7A10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC7A10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SLC7A10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC7A10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC7A10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SLC7A10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC7A10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SLC7A10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SLC7A10 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC7A10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.