Plasmide CRISPR d'Activation (h) SLC41A1: sc-406258-ACT

SLC41A1 code un transporteur membranaire du magnésium situé à la membrane plasmique, qui contribue à l’efflux cellulaire de Mg2+ et à l’homéostasie globale du magnésium, déterminant clé de l’activité enzymatique, du métabolisme dépendant de l’ATP et de la régulation des canaux ioniques. En modulant la disponibilité intracellulaire en Mg2+, SLC41A1 influence des processus de signalisation couplés aux protéines liant les nucléotides et aux réseaux de phosphorylation, et peut affecter la fonction mitochondriale ainsi que les réponses cellulaires au stress. Une régulation altérée du transport du magnésium a été associée à une excitabilité neuronale dérégulée et à des phénotypes métaboliques, faisant de SLC41A1 un nœud pertinent pour étudier l’homéostasie ionique dans des contextes pathologiques. Son expression et son activité sont donc fréquemment examinées dans des modèles de neurobiologie, de bioénergétique et de physiologie des transports.

SLC41A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC41A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SLC41A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC41A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC41A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SLC41A1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC41A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SLC41A1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SLC41A1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC41A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.