SLC41A1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406258-ACT

SLC41A1 codifica um transportador de magnésio da membrana plasmática que contribui para o efluxo celular de Mg2+ e para a homeostase global do magnésio, um determinante essencial da atividade enzimática, do metabolismo dependente de ATP e da regulação de canais iônicos. Ao modular a disponibilidade intracelular de Mg2+, o SLC41A1 influencia processos de sinalização acoplados a proteínas de ligação a nucleotídeos e a redes de fosforilação, e pode afetar a função mitocondrial e as respostas celulares ao estresse. Alterações na regulação do transporte de magnésio têm sido associadas à desregulação da excitabilidade neuronal e a fenótipos metabólicos, tornando o SLC41A1 um nó útil para estudar a homeostase iônica em contextos relevantes para doenças. Por isso, sua expressão e atividade são frequentemente examinadas em modelos de neurobiologia, bioenergética e fisiologia do transporte.

SLC41A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC41A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SLC41A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC41A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC41A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SLC41A1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC41A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SLC41A1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SLC41A1 em células tumorais com expressão de SLC41A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.