Plasmide CRISPR d'Activation (h) SLC35G1: sc-405723-ACT

SLC35G1 code une protéine membranaire présumée de la famille des transporteurs de solutés 35, impliquée dans le transport intracellulaire des sucres nucléotidiques et dans des processus associés à la glycosylation au sein de la voie sécrétoire. En influençant la disponibilité des sucres activés nécessaires à l’assemblage des glycannes, SLC35G1 est susceptible de moduler la glycosylation des protéines et des lipides, ce qui peut affecter le repliement des protéines, leur trafic intracellulaire et la communication cellule–cellule. Des altérations de la glycosylation et de l’activité des transporteurs sont fréquemment liées à une dérégulation des voies de signalisation et des réponses au stress, faisant de SLC35G1 une cible utile pour étudier comment le métabolisme de la voie sécrétoire façonne les phénotypes cellulaires. Les chercheurs étudient souvent SLC35G1 dans le contexte du trafic membranaire, de la protéostasie et de la régulation, dépendante des glycannes, de la fonction des récepteurs et des molécules d’adhérence, en lien avec des états cellulaires associés aux maladies.

SLC35G1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC35G1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SLC35G1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC35G1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC35G1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SLC35G1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC35G1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SLC35G1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SLC35G1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC35G1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.