Plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC35D1 (h): sc-407065

Présentation

SLC35D1 code un transporteur de sucres nucléotidiques localisé dans l’appareil de Golgi, qui assure l’import de l’UDP‑acide glucuronique et de l’UDP‑N‑acétylgalactosamine dans la lumière afin de soutenir la biosynthèse des glycosaminoglycanes. En contrôlant la disponibilité des substrats pour les glycosyltransférases, SLC35D1 influence l’assemblage des protéoglycanes, l’organisation de la matrice extracellulaire et le développement du cartilage. La perturbation de SLC35D1 est associée à des phénotypes de dysplasie squelettique compatibles avec une production altérée de sulfate de chondroïtine et une composition modifiée des protéoglycanes. Par conséquent, SLC35D1 est fréquemment étudié dans les voies liées à la glycosylation golgienne, à la biologie de la matrice et à la différenciation des chondrocytes et d’autres lignées de tissus conjonctifs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC35D1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC35D1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC35D1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC35D1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SLC35D1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC35D1 pour l'étude de la signalisation de SLC35D1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC35D1 essentiels à la fonction de SLC35D1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC35D1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SLC35D1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SLC35D1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC35D1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SLC35D1 plasmide HDR (h) et le SLC35D1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC35D1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC35D1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.