Plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC25A33 (h): sc-413606

Présentation

SLC25A33 code un transporteur de la membrane interne mitochondriale impliqué dans l’acheminement des nucléotides pyrimidiques nécessaires au métabolisme intramitochondrial des acides nucléiques. En soutenant la réplication et la transcription de l’ADN mitochondrial ainsi que le renouvellement des ARN, SLC25A33 relie l’homéostasie des nucléotides à la capacité de phosphorylation oxydative et, plus largement, aux processus de contrôle de la qualité mitochondriale. Une altération du transport mitochondrial des nucléotides peut perturber la bioénergétique et accroître le stress réplicatif, reliant cette famille de transporteurs à des mécanismes pertinents pour la neurodégénérescence, les dysfonctions métaboliques et les contextes de maladies prolifératives. Par conséquent, SLC25A33 est fréquemment étudié dans des modèles de maintien mitochondrial, d’équilibre rédox et de signalisation adaptative au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC25A33 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC25A33 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC25A33, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC25A33 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SLC25A33.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC25A33 pour l'étude de la signalisation de SLC25A33, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC25A33 essentiels à la fonction de SLC25A33
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC25A33 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SLC25A33 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SLC25A33 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC25A33. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SLC25A33 plasmide HDR (h) et le SLC25A33 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC25A33 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC25A33 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.