Plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC25A29 (h): sc-406645

Présentation

SLC25A29 (solute carrier family 25 member 29) code un transporteur de la membrane interne mitochondriale impliqué dans l’import d’acides aminés basiques, en particulier l’arginine, vers la matrice mitochondriale, afin de soutenir les flux métaboliques au sein du réseau arginine/ornithine lié au cycle de l’urée et du métabolisme associé à l’oxyde nitrique. En modulant la disponibilité intramitochondriale en acides aminés, SLC25A29 peut influencer la respiration mitochondriale, l’équilibre rédox et des voies biosynthétiques dépendantes du métabolisme à un carbone et de la gestion de l’azote. Une expression ou une activité altérée des transporteurs mitochondriaux de la famille SLC25 est fréquemment associée à une reprogrammation métabolique et à une dysfonction mitochondriale observées dans divers contextes pathologiques, ce qui fait de SLC25A29 une cible utile pour des études mécanistiques du transport mitochondrial des acides aminés. Les recherches sur SLC25A29 éclairent également la manière dont la répartition des substrats mitochondriaux influence les réponses cellulaires au stress et l’homéostasie énergétique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC25A29 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC25A29 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC25A29, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC25A29 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SLC25A29.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC25A29 pour l'étude de la signalisation de SLC25A29, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC25A29 essentiels à la fonction de SLC25A29
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC25A29 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SLC25A29 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SLC25A29 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC25A29. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SLC25A29 plasmide HDR (h) et le SLC25A29 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC25A29 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC25A29 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.