Plasmide CRISPR/Cas9 KO SLAMF1 (canine): sc-437301

Présentation

SLAMF1 (CD150) est un immunorécepteur de surface cellulaire de la famille SLAM, exprimé principalement sur les lymphocytes T et B activés, les cellules dendritiques et d’autres populations hématopoïétiques, où il coordonne la formation de la synapse immunologique et module la production de cytokines. Grâce à une liaison homotypique et à des interactions avec des adaptateurs tels que SAP/SH2D1A ainsi qu’avec des kinases en aval, SLAMF1 influence des réseaux de signalisation qui recoupent l’activation du TCR/BCR et les voies MAPK, PI3K–AKT et NF-κB, façonnant ainsi l’activation et la différenciation des lymphocytes. En immunologie canine, SLAMF1 sert de marqueur d’activation immunitaire et peut affecter les réponses antivirales, la communication entre leucocytes et la régulation de l’inflammation. Des altérations de la signalisation de SLAMF1 ont été largement associées à une dérégulation immunitaire et à des phénotypes lymphoprolifératifs, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la défense de l’hôte et des modèles de maladies à médiation immunitaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SLAMF1 (canine) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires canine. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SLAMF1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de SLAMF1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de SLAMF1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SLAMF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (canine) et le SLAMF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (canine2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SLAMF1 plasmide HDR (canine) et le SLAMF1 (canine2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.