Plasmide CRISPR/Cas9 KO SLAIN2 (m): sc-429242

Présentation

Slain2 code SLAIN2, un régulateur du suivi de l’extrémité plus des microtubules (+TIP) qui coopère avec les protéines EB et d’autres complexes +TIP afin de favoriser une croissance persistante des microtubules, leur capture au cortex et une dynamique correcte du fuseau mitotique. Par son rôle dans l’organisation du trafic dépendant des microtubules et de la polarité cellulaire, SLAIN2 soutient des processus tels que la progression mitotique, le transport intracellulaire et la croissance des neurites. La perturbation des réseaux +TIP et de la stabilité des microtubules est largement impliquée dans des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ainsi que dans l’instabilité chromosomique au sein d’états cellulaires prolifératifs. Slain2 chez la souris constitue donc un modèle accessible pour explorer le contrôle cytosquelettique de la division et de la différenciation cellulaires dans les systèmes mammifères.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SLAIN2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Slain2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Slain2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Slain2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SLAIN2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Slain2 pour l'étude de la signalisation de SLAIN2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Slain2 essentiels à la fonction de SLAIN2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Slain2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SLAIN2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SLAIN2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Slain2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SLAIN2 plasmide HDR (m) et le SLAIN2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Slain2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Slain2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.