Plasmide CRISPR d'Activation (m) SLAIN2: sc-429242-ACT

Slain2 code SLAIN2, un adaptateur de suivi de l’extrémité « plus » des microtubules, qui coopère avec les protéines EB et le complexe ch-TOG/XMAP215 afin de favoriser une croissance persistante des microtubules et de coordonner l’organisation du cytosquelette. En régulant la dynamique des microtubules, SLAIN2 influence le transport intracellulaire, la polarité cellulaire et la fonction du fuseau mitotique, des processus essentiels à la morphogenèse neuronale et au contrôle de la prolifération. Une perturbation des réseaux de régulation des microtubules peut altérer la croissance axonale et la connectivité synaptique, et peut également affecter la stabilité chromosomique via une assemblage du fuseau modifié. En recherche biomédicale chez la souris, Slain2 constitue un point d’entrée aisément exploitable pour étudier comment la régulation de l’extrémité plus des microtubules s’articule avec la progression du cycle cellulaire et les programmes de différenciation.

SLAIN2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Slain2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SLAIN2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Slain2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Slain2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SLAIN2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Slain2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SLAIN2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SLAIN2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Slain2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.