Plásmido CRISPR de Activación (h) Skp2 p45: sc-400534-ACT

SKP2 codifica la proteína con dominio F-box Skp2 p45, un componente de reconocimiento de sustratos del complejo ligasa E3 de ubiquitina SCF (SKP1–CUL1–F-box), que controla el recambio proteasomal de reguladores clave del ciclo celular. Al promover la ubiquitinación de dianas como CDKN1B/p27^Kip1 y otras proteínas inhibidoras del crecimiento, Skp2 favorece la transición G1/S, la competencia para la replicación del ADN y respuestas coordinadas de los puntos de control. La actividad de SKP2 se interconecta con programas de señalización PI3K–AKT, RB–E2F y vinculados a TGF-β, que determinan la proliferación, la senescencia y la adaptación al estrés. La expresión o función desregulada de SKP2 se ha asociado con alteraciones del control del ciclo celular e inestabilidad genómica en múltiples contextos relevantes para enfermedades, lo que la convierte en un nodo común para estudios mecanísticos de señalización oncogénica y homeostasis proteica.

Skp2 p45 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SKP2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Skp2 p45 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SKP2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SKP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Skp2 p45. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SKP2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Skp2 p45 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Skp2 p45 en células tumorales con expresión de SKP2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.