Plasmide Double Nickase (h) Ska1: sc-415109-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Ska1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Ska1 Double Nickase (h) et le plasmide Ska1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SKA1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Ska1 | sc-415109-NIC | 20 µg | $410.00 |
SKA1 code la sous-unité 1 du complexe associé au fuseau mitotique et au kinétochore (Ska1), un composant central du complexe SKA qui couple les attachements « en bout » kinétochore–microtubule aux microtubules du fuseau en cours de dépolymérisation pendant la mitose. Ska1 favorise un alignement chromosomique stable, l’extinction du point de contrôle du fuseau (spindle checkpoint) et le déclenchement opportun de l’anaphase, contribuant ainsi au maintien de l’intégrité du génome grâce à une ségrégation fidèle des chromosomes. Une altération de la fonction du complexe SKA peut favoriser l’instabilité chromosomique et l’aneuploïdie, des processus fréquemment étudiés dans le contexte des troubles prolifératifs et de l’évolution des cellules tumorales. En conséquence, SKA1 est largement utilisé comme point d’entrée moléculaire pour étudier la dynamique du kinétochore, le contrôle du point de contrôle mitotique et la progression du cycle cellulaire dans les cellules humaines.
Ska1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SKA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SKA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SKA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SKA1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.