Plasmide CRISPR/Cas9 KO Six2 (h): sc-402975

Présentation

SIX2 code Six2, un facteur de transcription à homéoboîte qui régule l’identité des cellules progénitrices et l’organogenèse en contrôlant l’engagement de lignée ainsi que les programmes de signalisation épithélio-mésenchymateuse. Au cours du développement humain, Six2 est surtout connu pour maintenir les progéniteurs du néphron et moduler, avec d’autres régulateurs du développement rénal, des réseaux transcriptionnels qui influencent le calendrier de différenciation et la structuration des tissus. Une expression dérégulée de SIX2 ou une activité altérée de Six2 a été impliquée dans des anomalies congénitales et dans une reprogrammation transcriptionnelle associée aux tumeurs, où des voies du développement sont détournées pour soutenir une croissance modifiée et une invasivité accrue. En tant que protéine nucléaire se liant à l’ADN, Six2 constitue un point d’entrée mécanistique pour étudier les circuits de régulation génique, la dynamique des états de la chromatine et les interactions entre voies de signalisation du développement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Six2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SIX2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SIX2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SIX2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Six2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SIX2 pour l'étude de la signalisation de Six2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SIX2 essentiels à la fonction de Six2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SIX2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Six2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Six2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SIX2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Six2 plasmide HDR (h) et le Six2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SIX2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SIX2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.