Plasmide CRISPR d'Activation (h) Siva: sc-403496-ACT

Le gène humain **SIVA1** code **Siva**, une protéine adaptatrice pro‑apoptotique initialement identifiée grâce à son interaction avec des membres de la famille des récepteurs du TNF, reliant des signaux extracellulaires de mort cellulaire à la signalisation intracellulaire. Siva participe à la régulation de l’apoptose et des réponses au stress cellulaire, avec des rôles rapportés dans la modulation de l’activité de **NF‑κB** et l’intégration de signaux influençant l’intégrité mitochondriale et l’activation des caspases. En orientant les décisions de destinée cellulaire et les voies de survie, la dynamique d’expression de **SIVA1** est fréquemment étudiée dans des contextes de transformation oncogénique, de réseaux suppresseurs de tumeurs et de signalisation liée à l’immunité. Une activité **SIVA1/Siva** dérégulée a été associée à une sensibilité modifiée aux stimuli apoptotiques ainsi qu’à des changements de la prolifération et des réponses aux dommages de l’ADN, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent dans des modèles liés aux maladies.

Siva Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SIVA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Siva Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SIVA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SIVA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Siva. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SIVA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Siva au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Siva dans les cellules tumorales présentant une expression de SIVA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.