Plasmide Double Nickase (r) SIRT5: sc-437317-NIC

SIRT5 est une désacylase mitochondriale des lysines dépendante du NAD+ appartenant à la famille des sirtuines, qui élimine préférentiellement les modifications succinyl, malonyl et glutaryl présentes sur des enzymes métaboliques. En régulant l’état d’acylation, SIRT5 influence le métabolisme central du carbone, notamment le cycle de l’urée, l’oxydation des acides gras, le flux du cycle TCA (cycle de l’acide citrique) et les réponses au stress oxydant, via la modulation de l’activité des enzymes mitochondriales. Dans des systèmes chez le rat, l’altération de la fonction de SIRT5 est utilisée pour explorer les liens entre la protéostasie mitochondriale et la reprogrammation bioénergétique dans des contextes associés au stress métabolique et aux lésions tissulaires. Ces voies sont fréquemment étudiées dans des modèles de métabolisme hépatique, d’énergétique cardiaque et de neuroinflammation, où la dynamique des acylations post-traductionnelles peut influencer la résilience cellulaire.

SIRT5 Le plasmide double nickase (r) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus dans les lignées cellulaires rat. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de . Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de . En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de .

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.