Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SIRT5 Double Nickase Plasmid (h): sc-416994-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SIRT5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SIRT5 Double-Nickase-Plasmid (h) und SIRT5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SIRT5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SIRT5: sc-271635
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SIRT5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-416994-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SIRT5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-416994-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SIRT5 kodiert eine mitochondriale, NAD+-abhängige Sirtuin-Deacylase, die bevorzugt Succinyl-, Malonyl- und Glutaryl-Modifikationen an Lysin entfernt und dadurch die Enzymaktivität im zentralen Stoffwechsel feinjustiert. Durch die Regulation von Signal- und Stoffwechselwegen wie dem Harnstoffzyklus, der Fettsäureoxidation und der oxidativen Phosphorylierung trägt SIRT5 dazu bei, die mitochondriale Homöostase und das Redoxgleichgewicht bei Schwankungen des Nährstoffangebots und unter Stress aufrechtzuerhalten. Eine veränderte SIRT5-Aktivität wurde mit metabolischer Umprogrammierung, Antworten auf oxidativen Stress und mitochondrialer Dysfunktion in Zusammenhang gebracht, wie sie in der Krebs- und kardiometabolischen Forschung beobachtet werden. Als posttranslationeller Regulator mitochondrialer Proteine wird SIRT5 häufig hinsichtlich seines Einflusses auf den Acylierungsstatus des Proteoms und nachgeschaltete Signalnetzwerke untersucht, die den Energiestatus mit zellulärer Anpassung koppeln.
SIRT5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SIRT5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SIRT5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SIRT5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SIRT5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.