Plasmide CRISPR/Cas9 KO SIRT2 (m): sc-425703
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- SIRT2 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique SIRT2, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SIRT2 Antibody (A-5): sc-28298
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO SIRT2 (m) | sc-425703 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Sirt2 code la désacétylase NAD⁺-dépendante SIRT2, une sirtuine principalement cytosolique qui régule l’acétylation de protéines impliquées dans la dynamique des microtubules, la progression du cycle cellulaire et l’homéostasie métabolique. SIRT2 module des processus clés, notamment le contrôle du point de contrôle mitotique, l’autophagie et les réponses au stress oxydatif, reliant la détection des nutriments à la fonction mitochondriale et au cytosquelette. Dans les systèmes murins, l’activité de SIRT2 a été associée à des voies pertinentes pour la neurodégénérescence, l’inflammation et la dysrégulation métabolique, ce qui en fait un nœud utile pour étudier la résilience au stress de manière spécifique aux tissus. Une désacétylation dépendante de SIRT2 altérée peut influencer des programmes transcriptionnels et des réseaux de protéostasie qui façonnent la susceptibilité à des phénotypes liés à l’âge in vivo et dans des modèles de cellules primaires.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SIRT2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sirt2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sirt2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sirt2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SIRT2.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sirt2 pour l'étude de la signalisation de SIRT2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Sirt2 essentiels à la fonction de SIRT2
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sirt2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le SIRT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SIRT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sirt2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le SIRT2 plasmide HDR (m) et le SIRT2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sirt2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sirt2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.