Plasmide CRISPR/Cas9 KO SIRP-α (h): sc-401201

Présentation

La protéine régulatrice du signal alpha (SIRP-α), codée chez l’humain par le gène **SIRPA**, est un récepteur transmembranaire de la superfamille des immunoglobulines, fortement exprimé sur les cellules myéloïdes, où elle module l’activation de l’immunité innée. Par phosphorylation des motifs ITIM cytoplasmiques et recrutement des phosphatases SHP-1/SHP-2, SIRP-α transmet un signal inhibiteur en aval de l’engagement de CD47 afin de réguler la dynamique du cytosquelette, la phagocytose, l’adhésion et les réponses cytokiniques. Cet axe CD47–SIRP-α façonne le comportement des macrophages et des cellules dendritiques au sein des microenvironnements inflammatoires et a été impliqué dans l’échappement immunitaire tumoral, l’inflammation chronique et la dysrégulation de la fonction myéloïde. SIRPA est donc largement étudié dans les voies contrôlant l’homéostasie immunitaire, la fonction des cellules présentatrices d’antigène et la reconnaissance cellule–cellule.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SIRP-α (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SIRPA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SIRPA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SIRPA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SIRP-α.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SIRPA pour l'étude de la signalisation de SIRP-α, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SIRPA essentiels à la fonction de SIRP-α
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SIRPA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SIRP-α plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SIRP-α plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SIRPA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SIRP-α plasmide HDR (h) et le SIRP-α (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SIRPA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SIRPA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.