Plasmide CRISPR/Cas9 KO SIMPL (m): sc-425749

Présentation

Irak1bp1 code pour SIMPL (signaling molecule that interacts with Pelle-like kinase), une protéine adaptatrice cytosolique impliquée dans la signalisation des récepteurs de type Toll (TLR) et du récepteur de l’IL‑1, en aval d’IRAK1. SIMPL a été associée à la modulation de programmes transcriptionnels dépendants de NF‑κB, qui façonnent l’activation de l’immunité innée, l’expression de gènes inflammatoires et les réponses au stress cellulaire. Dans des modèles murins, la perturbation de la signalisation associée à SIMPL peut influencer des voies dépendantes des cytokines, pertinentes pour l’inflammation chronique et des phénotypes de dérégulation immunitaire. Ces propriétés font d’Irak1bp1 une cible utile pour analyser la dynamique de la signalisation NF‑κB dépendante du stimulus et les interactions croisées avec d’autres voies inflammatoires dans des modèles cellulaires myéloïdes et stromaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SIMPL (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Irak1bp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Irak1bp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Irak1bp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SIMPL.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Irak1bp1 pour l'étude de la signalisation de SIMPL, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Irak1bp1 essentiels à la fonction de SIMPL
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Irak1bp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SIMPL plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SIMPL plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Irak1bp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SIMPL plasmide HDR (m) et le SIMPL (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Irak1bp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Irak1bp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.