Plasmide CRISPR d'Activation (h) SIK2: sc-406982-ACT

La kinase 2 inductible par le sel (SIK2) est une kinase sérine/thréonine de la famille des kinases apparentées à l’AMPK, qui coordonne la détection de l’état énergétique cellulaire avec des programmes transcriptionnels. SIK2 régule le contrôle, dépendant de la phosphorylation, des coactivateurs de CREB (CRTC) et des HDAC de classe IIa, influençant ainsi la signalisation cAMP/CREB, l’expression des gènes du métabolisme et les voies de réponse au stress. Dans les cellules humaines, l’activité de SIK2 a été associée à la différenciation des adipocytes et à l’homéostasie des lipides et du glucose ; elle contribue également à la progression du cycle cellulaire et à la dynamique du cytosquelette via la modulation de réseaux de signalisation impliquant des kinases. Une expression ou une signalisation dérégulée de SIK2 est étudiée en biologie du cancer et dans des modèles de maladies métaboliques, où l’altération du contrôle transcriptionnel et des voies liées à la prolifération constitue des lectures mécanistiques clés.

SIK2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SIK2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SIK2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SIK2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SIK2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SIK2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SIK2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SIK2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SIK2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SIK2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.