Plasmide CRISPR d'Activation (m) Sigma Receptor: sc-422068-ACT

Sigmar1 code le récepteur sigma-1, une protéine chaperonne membranaire du réticulum endoplasmique (RE) enrichie au niveau des membranes du RE associées aux mitochondries, où elle module les échanges de Ca2+ entre le RE et les mitochondries, la protéostase et les réponses cellulaires au stress. Le récepteur sigma-1 interagit avec des canaux ioniques et des complexes de signalisation pour influencer la neurotransmission, le remodelage lipidique et l’homéostasie rédox, en intégrant des voies liées à la réponse aux protéines mal repliées et à la bioénergétique mitochondriale. Dans les systèmes murins, l’activité de Sigmar1 a été associée au maintien neuronal, à la plasticité synaptique et à la régulation des signaux inflammatoires dans les contextes gliaux et de l’immunité périphérique. La dérégulation de l’homéostasie dépendante du récepteur sigma-1 est étudiée dans des modèles de neurodégénérescence, de douleur neuropathique et de stress cardiométabolique, ce qui appuie sa pertinence pour l’exploration mécanistique des voies.

Sigma Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Sigmar1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sigma Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Sigmar1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Sigmar1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sigma Receptor. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Sigmar1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sigma Receptor au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sigma Receptor dans les cellules tumorales présentant une expression de Sigmar1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.