Plasmide CRISPR/Cas9 KO Siglec-9 (h): sc-406675

Présentation

SIGLEC9 code Siglec-9, une lectine de type immunoglobuline se liant à l’acide sialique, exprimée principalement par les neutrophiles, les monocytes et certaines sous-populations de cellules NK, où elle agit comme récepteur inhibiteur. Grâce à une signalisation dépendante des motifs inhibiteurs à base de tyrosine des immunorécepteurs (ITIM) et au recrutement de phosphatases telles que SHP-1/2, Siglec-9 atténue les signaux d’activation en aval des voies des récepteurs de reconnaissance de motifs et des récepteurs Fc, modulant ainsi la libération de cytokines, la dégranulation et l’explosion oxydative. En détectant des glycanes sialylés à la surface de l’hôte ou de microorganismes, elle contribue à l’homéostasie immunitaire et à la modulation de l’inflammation aux interfaces muqueuses et vasculaires. Un dérèglement de la signalisation de SIGLEC9 et des modifications du paysage de sialylation ont été étudiés dans divers contextes, notamment les maladies inflammatoires chroniques, la biologie des infections et l’immunosuppression associée aux tumeurs au sein du compartiment myéloïde.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Siglec-9 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SIGLEC9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SIGLEC9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SIGLEC9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Siglec-9.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SIGLEC9 pour l'étude de la signalisation de Siglec-9, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SIGLEC9 essentiels à la fonction de Siglec-9
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SIGLEC9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Siglec-9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Siglec-9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SIGLEC9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Siglec-9 plasmide HDR (h) et le Siglec-9 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SIGLEC9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SIGLEC9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.