Plasmide CRISPR/Cas9 KO Siglec-12 (h): sc-413805

Présentation

SIGLEC12 code la Siglec-12, une lectine atypique de type immunoglobuline se liant à l’acide sialique, exprimée dans certains contextes épithéliaux et immunitaires et localisée à la surface cellulaire. En tant que membre de la famille des Siglec, Siglec-12 participe à des événements de reconnaissance dépendants des glycannes susceptibles d’influencer les interactions cellule–cellule, l’endocytose et la modulation des signaux en aval des voies associées aux immunorécepteurs. La protéine humaine est considérée comme fonctionnellement distincte des Siglec inhibitrices canoniques en raison d’altérations de motifs conservés, ce qui en fait un modèle utile pour étudier la divergence de la signalisation des récepteurs glyco-immunitaires. Une expression dérégulée de Siglec-12 a été étudiée dans le contexte de la biologie tumorale et des microenvironnements inflammatoires, soutenant des recherches sur les phénotypes dépendants de la glycosylation et le dialogue croisé immuno-épithélial.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Siglec-12 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SIGLEC12 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SIGLEC12, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SIGLEC12 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Siglec-12.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SIGLEC12 pour l'étude de la signalisation de Siglec-12, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SIGLEC12 essentiels à la fonction de Siglec-12
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SIGLEC12 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Siglec-12 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Siglec-12 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SIGLEC12. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Siglec-12 plasmide HDR (h) et le Siglec-12 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SIGLEC12 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SIGLEC12 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.