Plasmide CRISPR d'Activation (h) Siglec-1: sc-402497-ACT

SIGLEC1 code pour Siglec-1 (CD169), une lectine de type immunoglobuline se liant à l’acide sialique, exprimée de façon sélective par les macrophages et certaines populations spécifiques de cellules dendritiques. Elle assure la reconnaissance et la capture de glycoconjugués sialylés présents à la surface des cellules de l’hôte et des agents pathogènes. Par son rôle dans l’adhésion, l’endocytose et le traitement des antigènes, Siglec-1 contribue à la détection innée, aux interactions cellule–cellule et à la modulation des réponses inflammatoires au sein des microenvironnements tissulaires. Elle est fréquemment associée à des programmes d’activation induits par l’interféron de type I et à des états de polarisation des macrophages, ce qui en fait un marqueur utile et un nœud fonctionnel important en biologie immunitaire myéloïde. Une expression dérégulée de SIGLEC1 a été associée à des affections inflammatoires chroniques et auto-immunes, à des processus infectieux et à des phénotypes de macrophages associés aux tumeurs, ce qui souligne sa pertinence pour l’immunologie et la recherche sur les mécanismes des maladies.

Siglec-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SIGLEC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Siglec-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SIGLEC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SIGLEC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Siglec-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SIGLEC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Siglec-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Siglec-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SIGLEC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.