Particules Lentivirales d'Activation (h) SID-2: sc-407959-LAC

SIDT2 (SID-2) code une protéine membranaire lysosomale/endolysosomale impliquée dans la prise en charge des acides nucléiques au sein de la voie endocytique, notamment l’entrée et le trafic intracellulaire d’ARN double brin extracellulaire et d’espèces apparentées d’oligonucléotides. En couplant le transport membranaire à l’homéostasie lysosomale, SID-2 a été associé à des processus tels que la maturation des vésicules, la fonction autophagie–lysosome et les voies de détection de l’immunité innée qui répondent à des acides nucléiques aberrants. Une activité altérée de SIDT2 a été reliée à une dérégulation du stockage lysosomal et de la signalisation inflammatoire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la neurodégénérescence, des dysfonctionnements métaboliques et des interactions hôte–pathogène. Ces liens font de SIDT2 un nœud utile pour disséquer le trafic endosomal et les réponses au stress induites par les acides nucléiques dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SID-2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SIDT2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SID-2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SIDT2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SID-2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SIDT2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.