SHIP-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401622-NIC

INPPL1 codifica SHIP-2, una fosfatasi dell’inositolo 5 contenente un dominio Src homology 2 (SH2) che idrolizza il fosfatidilinositolo (3,4,5)-trisfosfato a fosfatidilinositolo (3,4)-bisfosfato, modulando ampiezza e durata della segnalazione PI3K–AKT. Attraverso la modulazione dei pool di fosfoinositidi, SHIP-2 influenza la segnalazione del recettore dell’insulina, il traffico di membrana, la dinamica del citoscheletro e l’endocitosi dei recettori, con effetti a valle sull’omeostasi del glucosio e sui programmi di crescita cellulare. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di SHIP-2 sono state associate a insulino-resistenza e a tratti metabolici, e la deregolazione del controllo della via PI3K collega inoltre INPPL1 a studi sulla segnalazione oncogena, sulla migrazione e sul crosstalk con le vie infiammatorie. Queste funzioni rendono SHIP-2 un nodo utile per analizzare i meccanismi di feedback dipendenti dalle fosfatasi nelle reti di segnalazione.

SHIP-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus INPPL1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di INPPL1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di INPPL1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con INPPL1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.