SHIP-1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-421137-LAC

Inpp5d kodiert SHIP-1 (SH2-Domänen-haltige Inositol-5-Phosphatase 1), einen in hämatopoetischen Zellen angereicherten negativen Regulator der Phosphoinositid-Signalübertragung, der PI(3,4,5)P3 zu PI(3,4)P2 hydrolysiert und damit die Signalstärke des PI3K–AKT-Signalwegs abschwächt. In murinen Immunzelllinien trägt SHIP-1 dazu bei, die Signalgebung downstream von Rezeptoren wie Fc-Rezeptoren, Zytokinrezeptoren sowie BCR-/TLR-Signalwegen feinzujustieren und so Aktivierungsschwellen in myeloiden und lymphoiden Zellen zu prägen. Über Crosstalk mit der MAPK-Signalgebung, Apoptoseregulatoren und zytoskelettalen Programmen beeinflusst es Proliferation, Überleben, Migration und die Produktion entzündlicher Mediatoren. Eine fehlregulierte Inpp5d/SHIP-1-Aktivität wird umfassend im Kontext von Immundysfunktionen und entzündungsassoziierten Phänotypen untersucht und ist daher für mechanistische Arbeiten in Modellen von Makrophagen, Mikroglia, B-Zellen und Mastzellen relevant.

SHIP-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Inpp5d-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

SHIP-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Inpp5d-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen SHIP-1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Inpp5d-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.