Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SHIP-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400619-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SHIP-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SHIP-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und SHIP-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf INPP5D abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SHIP-1: sc-8425
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SHIP-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400619-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SHIP-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400619-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
INPP5D kodiert SHIP-1 (Src-Homology-2-Domäne-enthaltende Inositol-5-Phosphatase 1), eine in hämatopoetischen Zellen angereicherte Lipidphosphatase, die PI(3,4,5)P3 zu PI(3,4)P2 umwandelt und dadurch Ausmaß und Dauer der PI3K–AKT-Signalübertragung begrenzt. Über Interaktionen mit phosphorylierten Immunrezeptoren und Adapterproteinen moduliert SHIP-1 die Signalübertragung über Fc-Rezeptoren und den BCR, Zytokinantworten, Chemotaxis sowie Überlebensprogramme in myeloiden und lymphoiden Zellen. Dieser Regulationsknoten beeinflusst die Homöostase der angeborenen und adaptiven Immunität und überschneidet sich mit Signalwegen, die entzündliche Signale und Entscheidungen über das Zellschicksal steuern. Eine dysregulierte INPP5D/SHIP-1-Aktivität wurde im Kontext hämatologischer Erkrankungen mit Immundysfunktion und onkogenen Signalprozessen in Verbindung gebracht und stellt damit ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zur Regulation des PI3K-Signalwegs dar.
SHIP-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des INPP5D-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von INPP5D abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die INPP5D-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit INPP5D-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.