Plasmide Double Nickase (h) Shc: sc-400914-NIC

SHC1 code pour la protéine adaptatrice Shc, un intermédiaire clé de signalisation qui couple les récepteurs à activité tyrosine kinase et les récepteurs de cytokines activés à des cascades en aval contrôlant la prolifération, la survie, la différenciation et les réponses au stress. Grâce à ses domaines PTB et SH2, Shc se lie aux récepteurs phosphorylés et recrute GRB2/SOS afin de favoriser la signalisation RAS–RAF–MEK–ERK ; elle peut également interagir avec les voies PI3K/AKT et d’autres voies MAPK selon le stimulus et le type cellulaire. SHC1 participe à la dynamique de la signalisation induite par les facteurs de croissance, au trafic des récepteurs et aux programmes transcriptionnels mitogènes, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du remodelage des voies oncogéniques et des mécanismes de résistance. Une expression ou une phosphorylation altérée de SHC1 a été associée à une activation aberrante des voies de signalisation dans le cancer, ainsi qu’à des réponses cellulaires dérégulées dans des contextes métaboliques et inflammatoires.

Shc Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SHC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SHC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SHC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SHC1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.