Plásmido Doble Nickase (h) Shc: sc-400914-NIC

SHC1 codifica la proteína adaptadora Shc, un intermediario clave de señalización que acopla las tirosina quinasas receptoras activadas y los receptores de citocinas con cascadas aguas abajo que controlan la proliferación, la supervivencia, la diferenciación y las respuestas al estrés. A través de sus dominios PTB y SH2, Shc se une a receptores fosforilados y recluta a GRB2/SOS para promover la señalización RAS–RAF–MEK–ERK, y también puede interactuar con PI3K/AKT y otras vías MAPK según el estímulo y el tipo celular. SHC1 participa en la dinámica de señalización por factores de crecimiento, el tráfico de receptores y programas transcripcionales mitogénicos, por lo que es relevante para estudios sobre el reordenamiento de la señalización oncogénica y los mecanismos de resistencia. La alteración de la expresión o la fosforilación de SHC1 se ha asociado con una activación aberrante de vías en cáncer y con respuestas celulares desreguladas en contextos metabólicos e inflamatorios.

Shc El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SHC1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SHC1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SHC1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SHC1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.