Partículas Lentivirales de Activación (h) SHARPIN: sc-404836-LAC

SHARPIN (interactor del dominio RH asociado a SHANK) es un componente central del complejo ensamblador de cadenas lineales de ubiquitina (LUBAC), donde coopera con RNF31/HOIP y RBCK1/HOIL-1L para regular la ubiquitinación enlazada a Met1 y la señalización aguas abajo de NF-κB. Al controlar la señalización dependiente de ubiquitina en receptores como TNFR y en vías de reconocimiento de patrones, SHARPIN ayuda a ajustar las respuestas inflamatorias, los programas de supervivencia celular y la proteostasis. También se ha implicado a SHARPIN en la modulación de la señalización de PTEN/PI3K–AKT y en procesos del citoesqueleto o asociados a adhesión, lo que lo vincula con fenotipos de proliferación, migración y respuesta al estrés. Por ello, la actividad desregulada de SHARPIN se estudia en contextos como la inflamación crónica, defectos en la señalización inmunitaria y la reconfiguración de vías asociada al cáncer.

Las partículas de activación lentiviral SHARPIN (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SHARPIN en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SHARPIN (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SHARPIN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SHARPIN. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SHARPIN y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.