Shank 1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403064-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Shank 1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Shank 1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Shank 1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SHANK1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Shank 1: sc-398630
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Shank 1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403064-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Shank 1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403064-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SHANK1 kodiert Shank1, ein multidomäniges Gerüstprotein, das in exzitatorischen postsynaptischen Dichten angereichert ist und dort Rezeptoren, Ionenkanäle sowie aktinregulierende Komplexe organisiert, um synaptische Architektur und Signalübertragung zu formen. Über Interaktionen mit PSD-Proteinen und Zytoskelett-Regulatoren trägt Shank1 dazu bei, glutamaterge Rezeptorkomplexe an nachgeschaltete Signalwege zu koppeln, die die Synapsenreifung, die Morphogenese dendritischer Dornen (Spines) und aktivitätsabhängige Plastizität steuern. Eine veränderte Funktion der SHANK-Familie wurde mit einer gestörten Organisation exzitatorischer Synapsen und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch SHANK1 einen hilfreichen Ansatzpunkt zur Untersuchung von Mechanismen darstellt, die die Konnektivität neuronaler Schaltkreise beeinflussen. Humanes SHANK1 wird daher häufig in Modellen der neuronalen Differenzierung und in Synaptogenese-Assays untersucht, um die Dynamik von Gerüstproteinen mit funktionellen synaptischen Outputs zu verknüpfen.
Shank 1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SHANK1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SHANK1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SHANK1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SHANK1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.