Shank 1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403064-ACT

SHANK1は、興奮性シナプスのシナプス後肥厚（postsynaptic density：PSD）に豊富に存在する多ドメイン型の足場タンパク質Shank 1をコードし、グルタミン酸作動性シグナル伝達複合体の編成を担います。Shank 1は、受容体やチャネルをアクチン制御タンパク質およびシグナル伝達タンパク質に連結することで、シナプス形成、樹状突起スパインの形態、ならびに活動依存的なシナプス可塑性を支持します。SHANK1は、NMDA/AMPA受容体複合体を中心とするアセンブリや、その下流の低分子GTPアーゼおよび細胞骨格リモデリング過程を含む、シナプス後構造と神経伝達を制御する経路に関与します。SHANKファミリーの足場タンパク質の遺伝学的・機能的な攪乱は神経発達および神経精神疾患様の表現型と関連しており、SHANK1はシナプス機能不全の機構解明研究における標的となっています。

Shank 1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SHANK1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Shank 1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SHANK1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSHANK1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Shank 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSHANK1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるShank 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSHANK1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるShank 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。