Plasmide CRISPR/Cas9 KO SH2D1A (m): sc-422910

Présentation

Sh2d1a code pour SH2D1A (SAP), un adaptateur à domaine SH2 principalement exprimé dans les lymphocytes T et les cellules NK, qui couple les récepteurs de la famille SLAM à la signalisation en aval. En coordonnant les complexes proximaux au récepteur et en modulant kinases et phosphatases, SH2D1A façonne la formation de la synapse immunologique, les fonctions effectrices cytotoxiques et l’aide des lymphocytes T lors des réponses immunitaires antivirales et humorales. La perturbation de la signalisation dépendante de SH2D1A dérègle l’activation des lymphocytes et l’homéostasie immunitaire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la dysrégulation immunitaire, de la susceptibilité aux infections virales et des phénotypes lymphoprolifératifs. Les modèles murins Sh2d1a sont largement utilisés pour analyser la contribution de l’axe SLAM–SAP à la biologie des centres germinatifs et au contrôle, par les cellules NK et T, des cellules infectées ou transformées.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SH2D1A (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sh2d1a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sh2d1a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sh2d1a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SH2D1A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sh2d1a pour l'étude de la signalisation de SH2D1A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sh2d1a essentiels à la fonction de SH2D1A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sh2d1a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SH2D1A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SH2D1A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sh2d1a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SH2D1A plasmide HDR (m) et le SH2D1A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sh2d1a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sh2d1a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.