Plásmido CRISPR de Activación (h) SH2D1A: sc-404747-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) SH2D1A es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) SH2D1A incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR SH2D1A (h) y el plásmido de activación CRISPR SH2D1A (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de SH2D1A. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SH2D1A Anticuerpo (A-8): sc-398118
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) SH2D1A | sc-404747-ACT | 20 µg | $397.00 |
SH2D1A codifica la proteína adaptadora asociada a SLAM (SAP), un adaptador de señalización que contiene un dominio SH2 y que acopla los receptores de la familia SLAM a vías de tirosina quinasas aguas abajo en los linfocitos. Al mediar eventos de señalización proximales al receptor, SAP regula la activación de linfocitos citotóxicos, las interacciones entre células T y células B, y la dinámica de los centros germinales que moldean las respuestas inmunitarias adaptativas. La actividad de SH2D1A influye en la formación de la sinapsis inmunológica y en las funciones efectoras mediante la modulación de cascadas de fosforilación y de la señalización de receptores tipo “checkpoint”. Las variantes patogénicas en SH2D1A se asocian con fenotipos de inmunodeficiencia primaria, incluida la enfermedad linfoproliferativa ligada al X, lo que subraya su importancia para la homeostasis inmunitaria y la investigación de la inmunidad antiviral.
SH2D1A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SH2D1A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
SH2D1A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SH2D1A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SH2D1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SH2D1A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SH2D1A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SH2D1A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SH2D1A en células tumorales con expresión de SH2D1A silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.