Plasmide CRISPR d'Activation (h) SH-PTP2: sc-400260-ACT

PTPN11 code SH-PTP2 (SHP2), une phosphatase tyrosine protéique cytosolique contenant deux domaines SH2 en tandem, qui assure le couplage des récepteurs tyrosine kinases activés et des récepteurs aux cytokines avec les voies de signalisation en aval. SHP2 est un régulateur positif majeur de la voie RAS–MAPK/ERK et contribue à la modulation de la voie PI3K–AKT, façonnant les programmes de prolifération, de survie, de migration et de différenciation cellulaires. En déphosphorylant des protéines d’ancrage (docking) et des nœuds de rétrocontrôle, SHP2 influence l’amplitude et la durée du signal au sein des réseaux de signalisation des facteurs de croissance et de l’immunité. Une activité et une expression dérégulées de PTPN11 sont associées à des syndromes du développement et à de multiples contextes cancéreux, ce qui en fait une cible fréquente d’études mécanistiques sur la signalisation oncogénique et les circuits de résistance.

SH-PTP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PTPN11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SH-PTP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PTPN11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PTPN11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SH-PTP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PTPN11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SH-PTP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SH-PTP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PTPN11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.