Plasmide Double Nickase (h) SH-PTP1: sc-400369-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) SH-PTP1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SH-PTP1 Double Nickase (h) et le plasmide SH-PTP1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PTPN6. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SH-PTP1 Antibody (D-11): sc-7289
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) SH-PTP1 | sc-400369-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) SH-PTP1 | sc-400369-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PTPN6 code la phosphatase tyrosine protéique cytosolique SH-PTP1 (SHP-1), un régulateur négatif majeur de la signalisation en aval des récepteurs immunitaires et des récepteurs aux cytokines. En déphosphorylant des kinases activées et des complexes récepteur, SHP-1 atténue les sorties des voies JAK/STAT, MAPK/ERK et PI3K/AKT, et contribue au maintien des seuils d’activation, de différenciation et des réponses inflammatoires. Dans les systèmes humains, une activité altérée de PTPN6 a été associée à une signalisation immunitaire dérégulée, à l’inflammation chronique et à des contextes d’immuno-oncologie, ce qui en fait un nœud d’étude pertinent pour analyser le contrôle par rétroaction dans des modèles de cellules hématopoïétiques et immunitaires. La perturbation fonctionnelle de SHP-1 éclaire également les recherches sur l’équilibre des réseaux phosphatases-kinases et sur la dynamique de la signalisation au voisinage immédiat des récepteurs.
SH-PTP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PTPN6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PTPN6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PTPN6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PTPN6.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.