Plasmide CRISPR d'Activation (m) SGK: sc-422906-ACT

Le gène murin **Sgk1** code la sérine/thréonine kinase régulée par le sérum et les glucocorticoïdes (SGK), une kinase de la famille AGC induite par les glucocorticoïdes, les facteurs de croissance et le stress cellulaire. SGK intègre la signalisation PI3K–PDK1 avec la régulation en aval des transporteurs et canaux ioniques, des programmes transcriptionnels et des voies de survie, notamment via la modulation de l’expression génique dépendante de FOXO et des interactions avec la détection des nutriments liée à mTOR. Par ces mécanismes, elle influence le transport épithélial du sodium, les réponses au stress osmotique et oxydatif, ainsi que la progression du cycle cellulaire. Une activité SGK dérégulée a été associée à des contextes de remodelage pathologique et de signalisation inflammatoire, faisant de **Sgk1** un nœud utile pour des études mécanistiques des voies d’adaptation au stress dans les tissus de mammifères.

SGK Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Sgk1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SGK Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Sgk1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Sgk1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SGK. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Sgk1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SGK au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SGK dans les cellules tumorales présentant une expression de Sgk1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.