Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sg III (m): sc-422812

Présentation

La sécrétogranine III (Scg3 ; Sg III) est une protéine de la famille des granines, enrichie dans la voie de sécrétion régulée, où elle contribue à la biogenèse des granules de sécrétion, au tri du cargo et à l’empaquetage des hormones peptidiques/neuropeptides dans les cellules endocrines et neuroendocrines. Chez la souris, Sg III participe à la formation des vésicules à cœur dense et à l’exocytose régulée, influençant le trafic vésiculaire et les programmes de sécrétion couplés à un stimulus. Une altération du fonctionnement du réseau des granines a été associée à une dérégulation de la signalisation neuroendocrinienne et de l’homéostasie métabolique, faisant de Scg3 une cible utile pour étudier l’organisation de la voie sécrétoire et la dynamique de libération dépendante des stimuli. L’étude expérimentale de Scg3 étaye les travaux mécanistiques sur la maturation vésiculaire, le traitement protéolytique des prohormones et le remodelage sécrétoire en réponse au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Sg III (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Scg3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Scg3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Scg3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Sg III.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Scg3 pour l'étude de la signalisation de Sg III, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Scg3 essentiels à la fonction de Sg III
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Scg3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Sg III plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Sg III plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Scg3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Sg III plasmide HDR (m) et le Sg III (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Scg3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Scg3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.